Arabidopsis recombination 애기장대 재조합

소개글

Arabidopsis(애기장대)를 이용한 recombination(재조합) 실험입니다.

목차

1. Introduction
2. Methods
3. Results
4. Discussion
5. Assignment
6. Reference

본문내용

1. Introduction
이번 실험은 Arabidopsis를 이용하여 mutant가 일어난 gene이 genome 상의 어디에 위치하는지를 찾아보는 실험이다.
실험에 이용된 Arabidopsis는 Col와 Ler의 두 가지 ecotype이며, Arabidopsis의 wild-type은 늦은 개화의 표현형을 가지고, mutant는 이른 개화의 표현형을 가지는 recessive한 mutant이다. Mutant가 recessive하므로 이들은 대립 유전자 모두에 mutant가 일어날 때만 그 표현형을 나타낸다.
실험에서는 homomutant인 Col와 wild-type인 Ler를 parents로 교배하여 F1을 얻는다. 이 F1은 mutant된 Col 하나와 wild-type의 Ler 하나를 가지며, 이 F1을 다시 자가 교배시켜 F2를 얻으면 늦은 개화를 보이는 것과 이른 개화를 보이는 것이 3:1의 비율로 얻어지게 된다. 이 과정에서는 recombination이 일어나 다양한 F2들이 얻어지게 된다.
Arabidopsis에서 genomic DNA를 추출한 다음, 실험은 rough mapping과 map-base cloning의 두 단계로 진행된다. Rough mapping을 통해 우리는 mutant가 Arabidopsis의 5개의 chromosome 중 몇 번 chromosome에 일어났는지를 확인할 수 있다. 추출한 DNA를 섞어 각 chromosome에 존재하는 marker들을 이용하여 PCR과 gel loading시킨다. 실험에서 mutant는 Col에 존재하므로 Col에만 band가 나타난 marker들을 찾아 그들이 존재하는 chromosome을 찾으면 mutant가 일어난 chromosome을 찾을 수 있다.
Map-base cloning을 통해서는 rough mapping 과정에서 알아낸 chromosome의 어느 부분에서 mutant가 일어났는지를 확인할 수 있다.

참고 자료

① Snustad, D. Peter., Simmons, Michael J.,『Principles of genetics』, 4th ed., Hoboken, NJ : Wiley, 2006.
② http://www.arabidopsis.org