제한효소의 특징과 사용방법

소개글

의학, 자연과학을 전공하는 학생들에게 유용한 정보입니다.

목차

1. 제한효소란?
2. 인식(절단) 부위의 특징
3. 반응완충용액(reaction buffer)
4. 제한효소를 이용한 DNA의 절단
1) 제한 효소 1 unit 의 정의
2) 제한효소로 DNA 절단 시 주의사항
5. DNA sample이 제한효소에 의해 잘 잘리지 않는 경우 체크할 사항
6. 두가지 제한 효소를 이용한 DNA절단
7. 제한 효소 이용한 DNA의 부분적인 절단

본문내용

) 제한효소로 DNA 절단 시 주의사항
(1) 효소에는 glycerol이 포함되어 있어 점도가 높으므로, tip 끝부분을 살짝 담기게 하여 glycerol이 묻지 않게 한다.
(2) 효소는 20 C 에서 50% glycerol 완충액 내에서 안정하게 존재함. 실온에 노출되는 시간을 가능한 한 줄인다.
(3) 제한효소 반응액 부피가 크면 DNA를 농축한다.
5. DNA sample이 제한효소에 의해 잘 잘리지 않는 경우 체크할 사항
1) 효소가 inactive하다
2) DNA가 순수하지 못하다. (여러 반응물들이 남아 있는 경우, phenol/chloroform extraction, ethanol ppt, 70% EtOH washing 후 제한효소 처리, 반응액에 2mM spermidine 첨가)
3) DNA가 완전 안녹았거나, 너무 점성이 크거나, 너무 진한 경우
4) DNA 가 denaturation 된 경우
5) DNA 가 degradation 된 경우

참고 자료

없음