[일반생물학실험] DNA 추출 및 전기영동

소개글

DNA Extraction과 Electrophoresis에 대한 자료입니다.

목차

1. 서론

2. 재료 및 방법
1) DNA extraction
2) Plasmid restriction
3) Quantitating DNA by spectrophotometer
4) DNA electrophoresis

3. 결과 및 분석

4. 결론 및 제언

5. 부록

본문내용

I. 서론
일반생물학실험 I 시간을 통해 DNA에 대한 일반적인 지식과 과학적인 정보를 이용할 수 있는 기술을 익힐 수 있었다. 실험실 안전과 이용 수칙 및 방법을 먼저 익힌 후 인간 DNA와 E.Coli DNA를 비교하여 DNA에 대한 전반적인 지식을 쌓았다. 그리고 준비한 protocol을 통하여 딸기의 DNA를 추출하고 보관하였다. 또한, E.Coli의 plasmid에 대해 학습한 후 restriction enzyme을 이용하여 각각 임의의 plasmid를 restrict하였다. 그와 더불어 이미 알려진 plasmid의 특정한 부분을 vector에 삽입하는 함께 진행하여 DNA electrophoresis를 하였다. 이 보고서에서는 위에서 언급한 실습과정과 그에 대한 결과를 분석할 것이다.
II. 재료 및 방법
1. DNA Extraction
꼭지를 떼고 깨끗이 씻은 딸기를 4개 정도 준비하였다. 준비한 딸기의 무게는 약 64g정도이며 Zipper loc에 넣고 으깨었다. DNA extraction buffer를 10ml 정도 넣고 더 으깬 후 혼합물을 거름종이로 걸러 그 중 액체를 3ml 취하였다. 4℃로 유지된 Isoprophyl alcohol을 약 2ml 정도 첨가한 후 10분 정도 관찰하였다. 추출된 DNA를 보관하기 위해 TE buffer를 0.5ml 사용하였다. 한편, DNA에 포함되어 있는 RNA를 파괴하기 위해 RNase(Stock: 10μg/μl)를 100μg/ml 만큼 첨가한 후 37℃에서 1분간 반응하였다. 마지막으로, 추출한 DNA를 TE buffer에 녹여 보관하였다.

2. Plasmid restriction
주어진 plasmid model을 검토한 후 Double digestion table을 참고하여 적절한 restriction enzyme과 가장 알맞은 buffer로써 BamHI, EcoRI을 처리할 때 EcoRI buffer를 사용하기로 하였다. 각각의 plasmid 3μl에 EcoRI buffer(10X)는 2μl, H2O는 13μl, enzyme은 각각 1μl를 첨가하여 전체 부피를 20μl로 맞추어 microfuge tube에 넣었다.

참고 자료

Purves ․ Sadava ․ Orlans ․ Heller, Life The Science of Biology, 2003
Campbell ․ Reece ․ Taylor ․ Simon, Biology Concepts & Connections, 2006