PCR의 개요와 종류, 특징

소개글

1. PCR 개요
- 1983년 Kary Mullis에 의해 고안
- DNA 중합효소를 이용하여 DNA, RNA의 특정영역을 시험관 내에 대량으로 증폭
- 80년대 제한효소(restriction enzyme)의 발견에 의한 gene cloning법 이후, 90년대 생명공학 연구의 혁명적인 사건
- 연구하고 싶은 유전자는 무엇이든 대량 생산이 가능

목차

1. PCR 개요
2. PCR 목적
3. PCR 구성 요소
4. PCR 의 3 단계
6. PCR 실험 시 유의하여야 할 사항
7. PCR의 종류

본문내용

1. PCR 개요
- 1983년 Kary Mullis에 의해 고안
- DNA 중합효소를 이용하여 DNA, RNA의 특정영역을 시험관 내에 대량으로 증폭
- 80년대 제한효소(restriction enzyme)의 발견에 의한 gene cloning법 이후, 90년대 생명공학 연구의 혁명적인 사건
- 연구하고 싶은 유전자는 무엇이든 대량 생산이 가능

2. PCR 목적
- 복잡한 전체 genome 중에 연구하고자 하는 유전자가 희귀유전자를 분석하고 연구하는데 가장 큰 문제점 이였다.
PCR은 특정 DNA sequence의 copy 수를 기하급수적으로 증폭시킴으로써 증폭된 DNA를 여러 가지 실험에 이용할 수 있고, 실험 결과를 토대로 분자생물학, 의학, 이학, 농학, 수의학, 식품과학, 환경과학 연구에 응용할 수 있음

3. PCR 구성 요소
1) DNA, RNA template: 증폭 대상이 되는 DNA, RNA
2) PCR Primers : 증폭할 부분을 잡는 짧은 염기서열
3) Taq polymerase : 열에 특별히 강한 유전자 합성효소
(Taq polymerase: Thermus aquaticus 라는 온천에 사는 세균의 DNA polymerase, 72℃가 최적온도, 94℃에서도 안정함)
4) dNTP (dATP, dCTP, dGTP, dTTP) : 유전자를 합성하는 재료가 되는 각 nucleotide
5) MgCl2+ : MgCl2+는 dNTP와 복합체를 형성하여 효소활성, primer annealing 등에 관여

4. PCR 의 3 단계
1) DNA 의 변성(denaturation) :
- 90℃∼96℃로 가열하여 두 가닥 DNA를 단일가닥 DNA로 분리
- 일반적으로 94℃사용: 높은 온도일수록 단일가닥 DNA로 잘 이행되지만
온도가 너무 높으면 Taq DNA polymerase 역시 activity(활성)가 낮아짐
- 첫 Cycle에서는 확실한 변성을 위하여 약 5분간 지속시킴
- 이 후의 cycle에서는 약 1분간 변성시킴.

참고 자료

없음