PCR 이란 무엇인가?

소개글

중합효소 연쇄반응(polymerase chain reaction, PCR)은 특정 DNA 부위를 특이적으로 반복 합성하여 시험관내에서 원하는 DNA 분자를 증폭시키는 방법으로서, 아주 적은 양의 DNA를 이용하여 많은 양의 DNA 합성이 가능하므로 분자 생물학적으로 제한효소의 발견만큼 획기적인 것이라고 할 수 있다..이리포트는 PCR에 대한 괄략적인 개요를 조사한 것이니 반드시 참고용으로만 사용하시길 바람니다....
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목차

※PCR (polymerase chain reaction)
◆PCR반응 준비하기.
▶Template DNA
▶Primer
▶dNTP (deoxynucleotide triphosphate)
▶10x PCR 완충용액
▶PCR의 세단계

본문내용

◆PCR반응 준비하기.

▶Template DNA.....
☞선택하여 증폭하고자 하는 target DNA 단편을 가리키는 용어.
☞전염성 병원체의 DNA 또는 RNA로부터 제조한 complementary DNA(cDNA), plasmid DNA 등을 쓸 수 있다.
☞정제하여 사용하는 것이 좋다.
▶Primer.....
☞target DNA 단편의 양쪽 끝에서 안쪽으로 약 20 bp 내외의 염기서열에 대응하는 oligonucleotide를 DNA 합성기로 합성.
☞G+C 비율이 반 정도 되게 디자인.
☞ Primer의 디자인이 PCR 반응의 성공 유무의 90%를 차지.
▶dNTP (deoxynucleotide triphosphate).....
시약상에서 dATP, dCTP, dGTP와 dTTP(각각 100 mM stock)을 구입한 후 혼합하여 사용한다. 양은 target DNA의 길이에 따라 다를 수 있으나 각각 20∼200 μM 정도를 사용한다.
▶10x PCR 완충용액.....
Magnesium: Primer가 template DNA에 결합하는 능력.
Template 및 PCR 산물의 변성온도,
KCl: Primer가 target DNA에 결합하는 것을 도와줌.
Gelatin 또는 bovine serum albumin(BSA): Taq DNA polymerase의 안정화.
▶Taq DNA polymerase.....
DNA에 합성에 필수적인 효소로서 RNA polymerase와는 다른 DNA에 복제에 관여하는 효소로서, 앞글자의Taq은 온천에서 사는 Thermus aquaticus라는 균주에서 따온 이름이고, polymerase는 효소를 나타내는 것이다. 이 균의 활동 적정온도는 70°C∼74°C이며 95°C에서 40분이 지나도 50% 정도의 활성이 남아 있다.

참고 자료

연세대학교 의과대학 분자생물학교실
광주보건대학교 임상병리과