transformation

소개글

클로닝 다음실험

Goal
-ligated plasmid와 E.coli를 재조합할 수 있다.
-재조합된 E.coli를 심을 수 있다.

목차

1.Indroduction
2.Materials and methods
3.Results
4.Discussion

본문내용

3.Results and discussion
1) 2, 3 ,4번 샘플에 대해 Transformation efficiency(Number of colonies / ng of DNA)를 나타내어라.
- 우리 조는 2번 샘플에서만 콜로니가 발견되었다. Plate를 8등분하여 그 중 한 1 ng/ μl이었고 사용한 부피는 l이므로 총 plating에 사용된 DNA는 10ng이다. 그러므로
Transformation efficiency (Number of colonies / ng of DNA)= 640 colonies/10ng
=64 colonies/ng of DNA
이다.
1번과 3번 샘플에서는 이론적으로 콜로니가 생성되지 않는 것이 바람직(아래2번 참고)하지만 많은 콜로니가 생성되어야 하는 4번 샘플(SYT11 ligated pGEX-4T)에서 콜로니가 생성되지 않아 실험과정 중에 실수가 있었던 것으로 생각된다.
1,2,3번 샘플이 이론적인 결과를 나타낸 것으로 보아 실린 배지, vector에는 이상이 없는 것으로 생각된다. 아마도 저번 실험과정에서 SYT11 DNA와 pGEX-4T ligation이 제대로 이루어지지 않은 것 같다.
원래 4번 샘플에서의 콜로니를 가지고 Bookkeeping plate를 만들어야 하는데 우리 조에서는 콜로니가 생성되지 않았으므로 다른 조의 콜로니를 사용하였다. Plate를16개의 구역으로 나눈 후 한 개의 구역에 한 개의 콜로니를 두 번 심는다. 이는 SYT11 ligated pGEX-4T가 제대로 대장균에 재조합된 콜로니를 선별해 내기 위함이다.
2) Transformation 실험에 대한 각 샘플(Tube #1~4)들의 의미를 토의하여라.

참고 자료

없음