Monoclonal 항체의 제작방법

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목차

Monoclonal 항체의 제작방법
1. 서론
2. 원리
3. 준비물
1) 동물
2) 시약
3) 기구
4. 프로토콜
1) 동물의 면역
2) 세포융합
3) 항체 생산세포(Hybridoma 세포)의 선택
A) ELISA 에 의한 선택
B) Western blot에 의한 확인
4) Hybridoma 세포의 clone화
5) 항체의 characterization
6) 항체의 대량 제작과 정제

본문내용

Monoclonal 항체의 제작방법
Monoclonal 항체는 한정된 항원인식을 가지고 있기 때문에 항체의 특이성이 높고, 상호작용의 해석, 활성저해실험 등 여러 가지 생화학적 해석에 유용하다. 또한 반영구적으로 같은 성질을 가진 항체를 지속적으로 얻을 수 있다는 등의 장점이 있다.
1. 서론
1975년 G.Koheler과 C. Milstein에 의해 항체 산산 B 세포와 증식능을 가진 myeloma세포를 융합하여, 항체생산을 지속적으로 할 수 있는 hybridoma 세포를 얻을 수 있다는 것이 처음으로 시사되었다. 이 세포는 한 가지 항원부위를 인식하는 항체를 생산하는 clone이기 때문에 항체는 monoclonal항체라고 부른다. Monoclonal 항체는 항원인식이 하나이기 때문에, 특이성이 높고, 상세한 생화학적 해석이 가능한 반면, 조직염색으로 염색하기 힘들며, 면역침강법에서는 복수의 항원 인식부위를 가지는 polyclonal 항체보다 취급하기 힘든 경향이 있다. Monoclonal항체는 제작 시간과 努力, 기술을 필요로 하지만 한번 hybridoma 세포가 얻어지면, 특이성, 역가 등이 일정한 항체를 지속적으로 얻을 수 있다.
2. 원리
Aminopterin (A) 으로 de novo 합성을 저해한 조건 하에서는 hypoxantine (H)과 thymidine (T) 를 이용한 핵산의 합성(salvage경로)을 이용하지 않는 한, 세포는 살아남을 수 없다. 이 salvage경로에 필수적인 HGPRT(hypoxantine-guanine-phosphoribosyltransferase) 효소를 가지지 않는 myeloma 세포는 HAT 선택 배지 중에서 성장할 수 없다. 한편 정상세포는 B세포는 myeloma 세포가 융합한 hybridoma 세포만이 HAT 선택배지에서도 성장할 수 있다는 점을 이용하여 목적으로 하는 항체생산 hybridoma

참고 자료

없음