DNA Cloning(Ligation, competent cell, 형질전환, PCR)

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목차

1. 이론
-Ligation
-competent cell
-형질전환
-PCR

2. 과정
-Agarose gel에서 DNA절편분리
-Ligation과 competent cell의 제조
-대장균의 형질전환
-Plasmid 분리
-PCR (중합효소 연쇄반응)

3. 결과
4. 고찰

본문내용

1. 이론
․ Ligation
Ligation은 문자 그대로 DNA나 RNA의 끝을 이어주는 과정을 가리키는 용어이다. 이 반응에 이용되는 효소를 ligase라 하며 DNA를 기질로 사용하는 ligase를 DNA ligase, RNA를 기질로 사용하는 ligase를 RNA ligase라 한다. RNA ligase는 특수한 목적이 아닌 경우 잘 사용하지 않는다. 유전자 재조합 과정에 사용되는 ligase는 주로 DNA ligase이며 이 효소는 원핵세포, 진핵세포, 바이러스 등에서 유래한 것이 있는데, 현재 많이 사용되는 ligase는 T4 DNA ligase와 E. coli DNA ligase이다. T4 DNA ligase는 cofactor로 ATP를 필요로 하고, E. coli ligase는 NAD+를 필요로 한다. 이들 두 ligase는 blunt-ended DNA, cohesive-ended DNA, nicked DNA등에 모두 작용할 수 있으나 E. coli DNA ligase 는 T4 DNA ligase와 비교할 때 blunt-ended DNA에 작용하는 힘이 약하므로 일반적인 유전자 재조합 과정에서는 T4 DNA ligase를 더 많이 사용하는 경향이 있다.
DNA ligation-phosphodiester bond

․ competent cell
E.coli를 포함한 대부분의 박테리아는 일반적인 환경에서 극히 제한된 양의 DNA만을 받아들인다. 이러한 종류를 효과적으로 transformation 하기 위하여 박테리아는 DNA를 받아들이는 능력을 향상시키는 물리적, 화학적 형태의 처리가 필요하다. 정상적인 bacteria cell에 이러한 물리적, 화학적 처리를 하여 외부의 DNA가 잘 들어갈 수 있도록 만든 cell을 competent cell이라고 한다.

․ 형질전환(transformation)
세포의 파괴 등에 의해 노출되어 외부로 방출된 DNA가 다른 세포로 끼어 들어가는 과정을 말한다. 이 과정에서 세포간의 직접적인 접촉이나 다른 매개체의 도움이 관여하지 않는다. 형질전환이란 용어는 그리피스가 세균의 일종인 폐렴쌍구균에서 쥐에게 독성을 나타내는 형질이 죽은 세균으로 부터 살아있는 세균으로 전달되는 과정을 발견하고 명명되었고, 이때 전달되는 물질은 물론 DNA 이다.
자연계에서 이러한 현상이 일어날 확률은 낮은 편이다.

참고 자료

없음