[생명과학실험]SDS-PAGE를 이용한 단백질의 전기영동

소개글

20점만점에 19점 얻은 레포트입니다.
실험 과정을 직접 찍은 사진과 제가 직접 그린 그림, 필기 포함하고 있습니다.
introduction에 포함된 내용은 외국 사이트에서 검색한 내용을 바탕으로 해석한 것이 대부분이므로 100%제가 직접 작성한 레포트입니다.
단백질 혼합 용액에서 DEAE column chromatography를 통해 얻은 단백질 시료를 SDS-PAGE 전기영동을 거쳐 원하는 단백질을 분리하는 실험입니다.
western blot을 하기 위한 준비도 함께했습니다.

목차

주제
실험목표
실험일시
실험도구
Introoduction
1. SDS-PAGE (sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis)
2. Western Blot
- What is Western blot?
- Nitrocellulose Membrane
3. Coomassie Staining

Methods
직접 찍은 사진과 그림 포함입니다.

Result
실험 결과 사진 포함합니다.

Discussion

References

본문내용

주제 : SDS-PAGE를 이용한 단백질의 전기영동
실험목표 : 단백질 시료를 전기영동을 통해 분리해 낸 후, 반은 Coomassie staining을 하고 반은 western blot을 위해 nitrocellulose membrane에 transfer 한다.
실험일시 : 2008년 4월 1일 2:00p.m.~ 6:00p.m.
실험도구 :


Introoduction

1. SDS-PAGE (sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis)
SDS-PAGE는 단백질을 전기영동 이동성에 따라 분리하기위한 생화학적, 유전학적, 분자생물학적 방법이다. 단백질의 전기영동 이동성은 그것들의 polypeptide chain의 길이나 분자량과 관계가 있다. 또한 SDS-PAGE를 통해 분리하고자 하는 대부분의 물질이기도 한 단백질은 양쪽성을 띠며, pH에 따라 양의 charge를 가질 수도 있고 음의 charge를 가질 수도 있다. 즉, isoelectric point 보다 낮은 pH에서는 양의 전하를, 그보다 낮은 pH에서는 음의 전하를 띤다. 따라서 단백질 혼합물을 곧바로 전기영동처리하면 단백질은 일사분란하게 움직이지 않을 수도 있고, 분자량이 같은 단백질도 polypeptide chain의 길이 등에 영향을 받아 다른 속도로 분리될 수 있다는 문제점이 발생한다.
이에, 먼저 단백질을 SDS로 처리하여 그 접힌 구조를 펼쳐줘야 할 뿐 아니라 SDS가 단백질과 결합하여 SDS-단백질 복합체를 형성하면 SDS의 sulfate group으로 인해 protein 자체의 전하는 거의 무시되고 강한 음전하를 띠게 되는 현상을 이용한다. SDS-PAGE는 protein을 정량화하고 비교하는 데 있어서 그 비용이 저렴하고 재현성이 높으며 신속하게 수행할 수 있는 방법이기에 실험실에서 일반적으로 쓰이는 방법이기도 하다.

참고 자료

*Western blotting 방법 그림-
http://biochemistry.yonsei.ac.kr/biochem_workshop/western_blot.php
*Western blot 네이버 검색 - http://blog.naver.com/killer3br/45814630
*Western blot 네이버 검색 –
http://biochemistry.yonsei.ac.kr/biochem_workshop/western_blot.php
*Nitrocellulose에 대한 Wikipedia 검색 - http://en.wikipedia.org/wiki/Nitrocellulose
*Western blot에 대한 Wikipedia 검색 - http://en.wikipedia.org/wiki/Western_blot
*Coomassie에 대한 Wikipedia 검색 - http://en.wikipedia.org/wiki/Coomassie