[면역학실험] indirect ELISA

소개글

indirect ELISA를 이용한 면역관용(tolerance) 검증 실험에 관한 보고서입니다.

목차

1. 실험목적

2. 실험 기구 및 재료

3. 실험방법

(1) immunization(실험 전 혈청 준비 단계)
1) 생쥐(mouse)들의 혈청 처리 부류
2) 혈청 준비 과정

(2) indirect ELISA 과정

4. 결과
(1) ELISA Reader를 이용한 490nm 흡광도 측정값
(2) 각 개체군별 흡광도 도표

5. 이론과 고찰
(1) 항체(면역글로불린)의 종류
1) IgG (immunoglobulin G)
2) IgM
3) IgA
4) IgE

(2) 1차 면역반응과 2차 면역반응
(3) indirect ELISA
(4) ELISA Reader의 흡광도(Optical Density) 측청
(5) 실험 결과 분석

본문내용

ELISA (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay)
1. 실험목적
오브알부민(ovalbumin)에 대해 면역관용(tolerance)를 일으킨다고 알려진 콜레라톡신(cholera toxin)이 항체 생산에 미치는 영향을 Indirect ELISA를 통해 알아본다.

2. 실험 기구 및 재료
피펫(pipette), 멀티피펫(multipipette), 팁(tip), 96-well plate,
면역되었거나 면역되지 않은 생쥐(mouse)들의 혈청, 오브알부민[ovalbumin(OVA)],
2차 항체(goat anti-moust IgG-HRP 2a),
coating buffer(Carbonate buffer),
OPD(o-Phenylenediamine Dihydrochloride, 발색시약), (stop solution),
PBS(phosphate buffered saline), Tween-20(계면활성제 성분),
ELISA reader

3. 실험방법
(1) immunization(실험 전 혈청 준비 단계)
1) 생쥐(mouse)들의 혈청 처리 부류
가) 음성 대조군 : 먼저 PBS(Phosphate Buffered Saline)을 위강으로 먹이고(intragastric), 나중에 PBS를 주사(intraperitoneal)한 정상 생쥐군
나) 양성 대조군 : 먼저 PBS를 먹이고, 나중에 OVA-alum 용액을 두 번 주사해 면역시킨 생쥐군
다) 실험군 A : 먼저 OVA를 위강으로 먹이고, 나중에 OVA-alum 용액을 두 번 주사한 면역시킨 생쥐군
라) 실험군 B : 먼저 OVA와 CT를 함께 위강으로 먹이고, 나중에 OVA-alum 용액을 두 번 주사해 면역시킨 생쥐군

참고 자료

<기초면역학>, 임병우 등 3인 공저, 효일
<혈청검사학>, 김영활․서설 공저, 고려의학
http://www.koramlabtech.co.kr/web/bbs/board.php?bo_table=21&wr_id=32
http://www.mediver.com/bbs/view.php?id=immunology&page=1&sn1=&divpage=1&sn=off&ss=on&sc=on&select_arrange=headnum&desc=asc&no=25