유전자 조작실험

소개글

유전자 조작실험 중 igation 통한 재조합 plasmid 제조 와 재조합 plasmid를 이용한 형질전환 및 재조합 대장균 선별 하는 실험 결과 리포트이다.

목차

1.실험제목
2.실험목적
3,실험원리
4.실험기구및시약
5.실험방법
6.실험결과
7.고찰
8.참고문헌

본문내용

이번 실험 결과를 통해서 lacZ와 insert DNA가 X-gal과 반응 했을 때 어떻게 됐는지 볼
수 있다.
우리 실험 중 플라스크는 세 개를 했다. 그 이유는 반응이 잘 안 나왔을 때를 대비해서 여
러번 한 것이다. 먼저 우리가 실험한 결과를 보면 그림에서 푸른색과 흰색 두 가지의 색깔
이 나왔으며 흰색이 큰 점으로 나온 것은 우리가 spreading할 때 알코올 램프 가까이 에서
제대로 하지 않아 이물질이 들어 갔음을 알 수 있다. 또한 푸른색이 나온 것을 보면 lacZ가
X-gal을 파괴한 것을 알 수 있다. lacZ에서는 lactose를 분해하는 beta-galactosidase가 나오는데, X-gal은 lactose와 유사한 물질로서 beta-galactosidase가 lactose처럼 인식해서 분해를 한다. X-gal은 분해가 되면 푸른색을 띄기 때문에 푸른색을 통해 lacZ 와 X-gal이 반응 했음을 알 수 있다.
그리고 흰색이 나온 것을 보면 lacZ자리에 우리가 PCR 한 DNA가 대신 들어 가면서 lacZ를 파괴 한다. LacZ가 파괴 되면 배지에서 X-gal과 반응 하지 않아 흰색을 띄게 되는 것이다. DNA가 lacZ자리에 들어가면서 파괴하기 때문에 beta-galactosidase가 생성되지 않아서 X-gal과 반응하지 않아 흰색이 나오게 되는 것이다. 이 실험에서는 색깔을 통해서 PCR insert가 성공했는지 실패했는지도 확인 할 수 있다. 그림을 보면 푸른색이 흰색보다 더 많음을 알 수 있으므로 PCR insert이 잘 안됐음을 알 수 있다.
또한 실험에 쓰인 amphicilin배지에서는 plasmid가 들어있는 것만 배양이 가능하기 때문에 plasmid가 없는 E.coli는 죽고, plasmid 가 있는 E.coli는 배양이 된다. 그리고 amphicilin배지에 X-gal과 IPTG도 들어 있는데 이것들은 X-gal를 통해 PCR DNA가 삽입되었는지 알 수 있고, IPTG는 Lac Z 유전자의 유도를 위해 넣는다. IPTG를 넣음으로써 Lac Z 유전자의 전사가 이루어지도록 하는 역할이다. 그래서 E.coli에 PCR DNA가 들어간 E.coli는 흰색을 띄며 PCR DNA가 들어가지 않은 E.coli는 푸른색을 띄게 되는 것이다

참고 자료

http://cafe.naver.com/moleimmunology.cafe?iframe_url=/ArticleRead.nhn%3Farticleid=828
http://kin.naver.com/detail/detail.php?d1id=11&dir_id=110205&eid=O7/akRtgvbOkUdPJnGIZJdtmx32qJCRu&qb=cGhvc3Bob2RpZXN0ZXI=&pid=fMOrbdoi5T0ssu%2BIU2lsss--281528&sid=SOdmg9Yw50gAAGwzKqQ
http://ko.wikipedia.org/wiki/%EB%B0%95%ED%85%8C%EB%A6%AC%EC%98%A4%ED%8C%8C%EC%A7%80_T4
http://kin.naver.com/detail/detail.php?d1id=11&dir_id=110205&eid=hwVdv1vZD68bgTZqgvMHjMKH5PvW9jzW&qb=ZWxlY3Ryb3BvcmF0aW9u&pid=fMlP6woi5T8ssZqDUaNsss--517447&sid=SOgZS3r150gAADfpXVc
http://kin.naver.com/detail/detail.php?d1id=11&dir_id=110205&eid=CTVyM33Yi+AlKvygDJdmQUzIGeCeHT+4&qb=c2VsZWN0aW9uIG1hcmtlcg==&pid=fMlimloi5T0ssuKuNissss--337329&sid=SOgZS3r150gAADfpXVc
http://blog.naver.com/mua6738?Redirect=Log&logNo=150035230778
http://blog.naver.com/h2hiro28?Redirect=Log&logNo=140037000390
http://blog.naver.com/helperwh?Redirect=Log&logNo=150010815584
d1id=11&dir_id=110205&eid=v8gxZdlS/qTOuDFy6q6YCps0GsVKxKVL&qb=aXB0Zw==&pid=fdPVjloi5Usssauue7dsss--263389&sid=SQes