Beta-galactosidase 정제

소개글

Beta-galactosidase 정제 실험레포트 입니다.
이 실험에서는 β-galactosidase를 Ion-chromatography법으로 정제한 후, 효소활성을 알아보고 SDS-PAGE를 통해 β-galactosidase의 분자량을 추정했습니다.
A+을 받은 레포트이며, 매우 자세히 서술하였습니다.

목차

1. Introduction
1) Ion-exchange chromatography의 원리
2) 실험 조건
(1) 담체(gel)의 선택
(2) Buffer(완충액)
(3) 시료액
(4) 유속
(5) 용출, column의 보존
3) Beta-galactosidase
4) SDS-polyacrylamide gel 전기영동(SDS-PAGE)
(1) 실험원리
(2) SDS-PAGE
(3) 단백질 염색
* Reference

2. Meterials & Method
3. Result
4. Discussion
5. Reference

본문내용

Ⅰ. Introduction


1. Ion-exchange chromatography의 원리

이온교환 chromatography(Ion-exchange chromatography)는 gel 여과(filteration) chromatography와 병행한 일반적인 정제방법이며, 가용성 단백질의 대부분에 걸쳐 적용이 가능하다.
단백질은 중성의 수용액 중에 있어서, 아미노기가 -NH3+에, carboxyl 기가 -COO-에 해리 되어있다. 이와 같은 정부의 전하를 가진 물질은 양성전해질(ampholytes)이라 부르며, 그러한 총 전하는 pH에 존재하고 있다. 총 전하가 Zero로 된 pH는 등전점(pI)라 부른다. [그림1-1]에 나타난 것처럼 단백질의 총 전하는 등전점 보다 높은 pH는 negative가 되며, 등전점보다 낮은 pH에서는 positive가 된다. 한편 이온 교환 chromatography에 이용되는 담체(gel)에는 positive 전하를 가진 음이온 교환체와 negative 전하를 가진 양이온 교환체가 된다. [표1-1] negative의 총전하를 가진 단백질은 positive 전하를 가진 음이온 교환체에, positive 총 전하를 가진 단백질은negative 전하를 가진 양이온 교환체에 결합한 단백질의 용출에는 용출 buffer의 이온 강도(염농도)를 증대시키는 방법이 일반적으로 이용되어지고 있다. 이온강도(염농도)의 증대는 이온 교환체에 결합하는데 이온을 증가시킨다. 대이온이 단백질 대신에 이온 교환체에 결합하고 결합이 약한 단백질로부터 순차적으로 유리하고 용출되어진다. [그림1-2] 이와 같이 이온 교환 chromatography는 단백질이 가진 총 전하와 해리와의 정전기적 결합(이온결합)을 이용하는 chromatography이다.

참고 자료

① 岡田雅人외 1 / 김승호 외 1 / 단백질 실험노트(상) / 월드사이언스 / 2001 / pp.135 ~ 140
② 岡田雅人외 1 / 김승호 외 1 / 단백질 실험노트(상) / 월드사이언스 / 2001 / pp. 7 ~ 23
③ Alan J.Barrett / Proteolytic enzymes : serine and cystein peptidases / 1994 / California : Academic press
④ Ricard J, Simpson / Purifying proteins for proteomics: a laboratory manual / Cold spring harbor laboratory press / 2004 / pp. 121 ~ 145