[생명공학 실험] Colony PCR

소개글

생명공학 실험 Colony PCR 레포트 입니다~
실험 사진과 잘 정리된 디스커션으로 좋은 점수를 받았던 겁니다~
좋은 자료되세요~

목차

1. Title
2. Date
3. Objective
4. Theory
1) Replication origin
2) Antibiotics resistance gene
3) Multiple cloning site(MCS)와 LacZ
5. Instrument & Reagent
6. Procedure
7. Reference
8. Result
9. Discussion

본문내용

1. Title Colony PCR
2. Date 2008. 11. 12
3. Objective
- Colony PCR의 원리를 이해하고 실험법을 익힌다.
4. Theory
- E.coli나 효모(yeast) clone이 ligation이 잘되어 원하는 DNA 단편을 가지고 있는 플라스미드가 삽입된 colony인지 확인하는 방법으로 PCR과 동일한 과정을 거치나 template DNA 대신 형질 전환시킨 white colony를 사용하여 T-vector상의 primer와 PCR한다.
사용되는 primer는 T7 promotor primer와 SP6 promotor primer로 이를 사용해 증폭시킨다.

1) Replication origin : 이 부분은 plasmid가 자가 복제할 때 처음 인식하는 부위이므로 모든 plasmid에 꼭 필요한 부분이다. 그림에서 보이는 (ColE1)ori라고 씌여진 부분.
* f1(+) origin이라는 것 - 이것은 사실 plasmid의 origin of replication이 아니라 bacteriophage의 origin으로 여기에 삽입해 놓으면 이 plasmid가 때로는 bacteriophage처럼 행동하기도 한다. 어느 쪽 strand가 single strand 상태로 존재하는가에 따라 f1(+) 혹은 f1(-) origin을 이용한다.
2) Antibiotics resistance gene : 항생제에 내성을 나타내는 유전자로 대개는 ampicillin resistance gene이 들어 있는데, 이 경우 여기서 나오는 단백질은 그 유명한 beta-lactamase이고 AmpR이라고 쓴다.

참고 자료

없음