GST발현 및 정제

소개글

단백질의 정제는 유전자 재조합 기술을 이용하여 원하는 유전자 sequence 앞 또는 뒤에 특정 ligand에 affinity 갖는 carrier를 보유한 Tag (fusion partner) 삽입, 발현하여 고순도로 정제를 한다. 발현 및 정제에 대해서 자세하게 기술한 발표자료입니다.

목차

Ⅰ. 단백질의 정제
Ⅱ. GST 의 발현
1. Vector
2. Host
Ⅲ. GST 의 정제
Ⅳ. 실험방법

본문내용

Ⅰ. 단백질의 정제
2. Tag의 종류
① 효소 tags : β-galactosidase,
glutathione-S-transferase(GST)
② 단백질 tags : protein A
③ 금속친화성 : polyhistidine tag
④ 소수성 결합 : polyphenylalanine tag
⑤ 이온교환수지 : polyalanine tag


Ⅱ. GST 의 발현
1. Vector
1) pGEX vector
- GST를 coding하는 sequence
- tau promoter
: IPTG에 의해 발현 유도

Ⅱ. GST 의 발현
2) pGEX vector 의 종류
- pGEX-P, pGEX-T, pGEX-X, pGEX-2TK
- 10종류
- cleavage site 종류의 차이

Ⅱ. GST 의 발현
3) tau promoter
- lac operator
① lac repressor : repression
② IPTG : induction
Ⅱ. GST 의 발현
2. Host
- full-length fusion proteins의 발현 최대화
- cytoplasmic protease gene products (Lon, OmpT, DegP or HtpR들) 가 없음
→ proteolytic degradation 최소화
- BL21(DE3)

참고 자료

없음