[분자생물학 실험] OD값의 측정

소개글

생물학과 분자생물학 실험 리포트 입니다.

목차

1. Title
2. Material
3. Method
4. Result
5. Discussion
6. Reference

본문내용

3. Method
① 물에 녹인 펠렛의 일부를 적당히(50배~200배 정도) 희석시킨 후 ultraviolet absorbance spectrophotometer로 측정하여 DNA 양을 구한다. (A260=1 → 50㎍ dsDNA/㎖)
② A260/A280(protein)에서의 값을 비교한다. 비율이 1.8이상이면 순도 높고, 이하이면 순도 낮은 것이며 불순물이 많은 경우 phenol 처리부터 다시 한다.
③ OD값을 통해 구한 DNA 양을 가지고 PCR mixture를 만든다.
DNA template : 1 ul
Primer, upstream(10 pmoles/ul) : 1 ul
Primer, downstream(10 pmoles/ul) : 1 ul
2.5 mM dNTP : 4 ul
10x Taq buffer : 5 ul
Taq DNA polymerase(1u/ul) : 1 ul
-----------------------------------
water to 50 ul
④ 얼음을 준비하여 buffer와 dNTP를 서서히 녹인다.
⑤ 재료의 혼합을 얼음에서 수행하되 Taq pol.은 맨 나중에 넣도록 한다.
⑥ PCR 기계의 program을 setting 한다.
94°C : 5분
94°C 30초 - 60°C 30초 - 72°C : 30초 (30 cycle)
72°C : 5분
⑦ 기계의 온도가 94℃로 올라가면 준비된 sample을 넣어준다.
⑧ 모든 cycle이 완료되면(4℃일 때) 준비된 agarose gel에서 PCR product band를 확인한다.

참고 자료

Lehninger Principles of Biochemistry -4th Edition. Freeman
Molecular Biology -Fox. Mcgrawhill