효소의 고정화 및 반응효율의 측정과 비교

소개글

생물공학전공실험 과목에서 A+ 받은 자료입니다. 실험 제목은 "효소의 고정화 및 반응효율의 측정과 비교" 입니다.
효모 속에 있는 효소를 알겔화 과정으로 고정시키는 모든 과정을 직접 작성하였습니다.
고정화 된 효소의 효율 감소까지 계산되어 있습니다. 굉장히 구하기 힘든 자료입니다.
모든 과정의 실험방법과 실험결과, 토의 내용, 각 단계에서 필요한 계산 과정까지 작성되어 있습니다.

목차

[Introduction]

[본문]
1단계 – 준비 및 효모의 배양
2단계 – 전세포 효모 효소 제조
3단계 – 효모 효소 반응
4단계 – 효모 효소의 고정화
5단계 – 고정화 효소 반응

본문내용

[ Introduction ]

Ⅰ 실험 제목 : 효소의 고정화 및 반응효율의 측정과 비교
Ⅱ 실험 목적 :
이 실험은 총 5단계로 구성되어 있다. 실험의 목적은 우리가 효소를 직접 고정화 해보고, 효소가 고정화되기 전의 반응효율과 효소가 고정화된 후의 반응효율을 실험을 통해 직접 측정함으로써 비교해보기 위함이다. 이론적으로는 효소가 고정화되면 물질전달 저항으로 인하여 반응효율이 감소하게 되는데, 이를 이번 실험을 통해 확인해 보는 것이다.
Ⅲ 실험 이론
1) 효소의 고정화(Immobilization)란?
: 효소를 가두거나 한 곳으로 모아서 계속 재사용할 수 있게 하는 것을 말한다.
2) 고정화 효소의 장점
가. 고정화 효소를 사용하면 효소를 계속 반응기 안에 잔류시킬 수 있다.
나. 효소가 용액 중에 있다면 효소는 생성물과 함께 반응기를 빠져나갈 것이다. 손실된 효소를 보충하기 위하여 새로운 효소를 첨가하여 주어야 할 뿐만 아니라, 생성물에 효소가 섞여 있으면 효소를 다시 분리해주어야 하기 때문이다.

<중 략>

우리는 처음부터 효소의 양이 많지 않아서 효모효소 0.005g을 넣고 모든 bead를 다 넣고 실험측정을 하였다. 다른조를 보니 모두 bead의 양을 다르게 넣고 흡광도를 측정했었는데, 우리조는 같은 양의 효모효소의 흡광도를 고정화효소에 넣고 재었을 때 고정화효소의 활성이 고정화를 하지않았을 때보다 감소한다는 것을 알아내는게 실험의 취지로 생각했기 때문에 우리가 맞다고 생각하였다. 또한 앞단계에서 효모효소의 양을 너무 많이 써버려서 이렇게 할 수밖에 없었다. 5단계 실험에서 bead 430개를 다 넣고 시간에 따른 활성을 재야 고정화효소의 Km과 Vm를 구할 수 있는데 실험을 조금 잘못 한 것 같다. 확산계수와 bead의 크기를 사용하여 효소활성감소를 구하려고 했지만 책을 찾아보아도 찾을 수 없었다..T_T

▣ 5단계 : 고정화 효소 반응
1) 15mL conical tube에 각각 고정화된 효모 효소(비드)를 넣고, reaction buffer(4단계에서 사용한)를 반쯤 넣은다.
-고정화된 효모효소(비드)를 15mL conical tube에 4개에 각각 30개,60개,90개, 180개를 넣어 준다.
2) 여기에 pNPP의 최종 농도가 4mM(0.5mL)이 되도록 첨가한다.

참고 자료

없음